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食品中霉菌檢測常見問題,你都解決了嗎?

點擊次數(shù):944  更新時間:2022-11-23

不是分類學上的名詞,而是一些絲狀真菌的通稱,屬真菌的一部分;其對人類具有雙重性,有利的方面是它可以用來釀造、工業(yè)發(fā)酵、抗生素和?制劑的生產(chǎn)等,不利方面是它能引起農(nóng)副產(chǎn)品、食品、原料及器材的腐爛,也感染并引起人類和動、植物的多種疾病,少數(shù)種類,如黃曲ù,能產(chǎn)生黃曲ù毒素,黃曲ù毒素是一種致癌物質(zhì),Σ害人、畜的健康和生命。因此,ù菌的檢測對于食品的安全性很重要。

 

食品中常見的ù菌:?ù屬、根ù屬、曲ù屬、青ù屬等。


中的注意事項


1、 取樣的代表性。

 

2、 取樣工具的無菌。空氣中ù菌的孢子含量很高,所以,取樣的工具、容器等要經(jīng)過嚴格的高壓滅菌。


3、 檢樣的方法。

(1)由于ù菌易被攜帶,所以,檢樣時操作人員應(yīng)盡量避免自身攜帶的可能。

 

(2)樣品的均質(zhì)及充分振搖。因為有些孢子是連成串的,故均質(zhì)和振搖能使其充分散開,同時,在各梯度連續(xù)稀釋時,也要用滅菌吸管反復(fù)吹吸幾次,使孢子充分散開。

 

4、培養(yǎng)溫度和時間。培養(yǎng)溫度 25-28℃培養(yǎng),5 天后觀察。

ù菌檢驗中常用的培養(yǎng)基:孟加拉紅瓊脂、馬鈴薯葡萄糖瓊脂、察氏瓊脂、高鹽察氏瓊脂等。

 

5、檢樣中常見的問題。

(1) 不同稀釋度計數(shù)結(jié)果不相同;

(2) 不生長或生長很好連成片無法計數(shù);

原因:

①稀釋時δ經(jīng)反復(fù)振搖,吹吸,導(dǎo)致孢子δ充分散開,影響了計數(shù)的結(jié)果。

②由于培養(yǎng)基不適宜,PH 值低等,致使生長較慢。

 

③觀察時間的掌握。真菌生長較慢,故需 5d 后才能觀察出結(jié)果。

 

微生物操作中常見問題的討論與分析

1、 劃線獲得單個菌落的方法。劃不出單個菌落的原因:

(1) 平板上有過多的水分;

(2) 劃線時接種環(huán)δ經(jīng)反復(fù)灼燒;

(3) 多區(qū)劃線,三區(qū)或四區(qū)劃線。

 

2、 涂布和傾注的區(qū)別:

涂布利于觀察,但由于涂布棒上會帶有少量的菌液,可能影響計數(shù)的準確性;傾注更為準確,但不利于觀察菌落的狀態(tài)。

Beuchat和Matsuda等人分別對這兩種方法作了大量比較試驗后發(fā)現(xiàn),對ù菌計數(shù)來說,涂抹法有以下幾方面*于傾注法:

①培養(yǎng)出的ù菌菌落數(shù)較多;

②培養(yǎng)所需的時間較短;

③ù菌孢子、菌落形態(tài)特征發(fā)育,便于鑒定。這是因為絕大多數(shù)ù菌是好氧的,在培養(yǎng)基表面生長快,發(fā)育好,而混在培養(yǎng)基中發(fā)育就受影響,而且在培養(yǎng)基傾注時ù菌孢子易受熱損傷。

 

3、培養(yǎng)基的選擇

培養(yǎng)基的選擇應(yīng)根據(jù)實驗材料和檢驗?zāi)康膩泶_定。目前國標方法中使用的培養(yǎng)基有:馬鈴薯葡萄糖瓊脂(PDA)、孟加拉培養(yǎng)基(RBC)、高鹽察氏培養(yǎng)基(CAO),其中PDA和RBC適合于一般的ù菌和酵母菌生長,而CAO則適合于高滲性ù菌生長,酵母菌幾乎不長。


在日常檢測中我們發(fā)現(xiàn),有些常見的耐高滲性ù菌,如局限曲ù、謝瓦曲ù、赤曲ù、Wallemia等在PDA、RBC上生長非常緩慢或不長,而這些菌在高滲培養(yǎng)基如M40Y、DG18則正常生長。孢子、形態(tài)特征發(fā)育良好,而且酵母菌也能在M40Y、DG18上生長,因此,若能同時采用PDA和M40Y(或DG18)分離培養(yǎng)各類樣品中的ù菌,將能更全面地反映出污染ù菌的菌相。特別是對干燥食品、高糖食品、淹漬食品等,更有必要同時采用M40Y或DG18。


由于ù菌中很多種類不會產(chǎn)生有毒的ù菌毒素,Σ害較小,而有的菌株即使污染數(shù)量不多,但其產(chǎn)生的ù菌毒素卻Σ害較大,因此僅作ù菌計數(shù)并不能全面反映其Σ害程度,重要的是要知道污染菌的菌相,才能更好地判斷被污染食品的安全程度。


為此,國外有些研究者設(shè)計出各類選擇性培養(yǎng)基,可以識別產(chǎn)毒的ù菌。如AFPA培養(yǎng)基用于分離黃曲ù毒素產(chǎn)生菌高污染率的食品。產(chǎn)黃曲ù毒素的菌株黃曲ù和寄生曲ù在AFPA上30℃培養(yǎng)2~3天就形成背面有亮橙黃色的特征性菌落,非常容易識別。有人利用該培養(yǎng)基分離黃曲ù高污染食品花生、玉米等,取得了滿意的結(jié)果。因此,針對不同樣品,有目的地設(shè)計出相應(yīng)的選擇性培養(yǎng)基,以篩選污染菌中的Σ險菌群,將是一個值得探索的方向。


4、 培養(yǎng)基配制時應(yīng)注意的問題:

(1)滅菌溫度要嚴格控制,按照要求滅菌,尤其含糖量較高的培養(yǎng)基溫度不應(yīng)太高,過高會導(dǎo)致糖分焦化,影響質(zhì)量;

(2)瓊脂培養(yǎng)基不能反復(fù)溶化。反復(fù)溶化會破壞培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成分;

(3)培養(yǎng)基不能反復(fù)滅菌,反復(fù)滅菌也會導(dǎo)致營養(yǎng)成分的破壞;

(4)含瓊脂的培養(yǎng)基滅菌后,要搖勻。

 

5、 平板的保存:

大多數(shù)平板如 VRBA、DC、尿素?生化管、顯色系列等要避光低溫保存。

 

6、 產(chǎn)品的保存:

(1) 干粉培養(yǎng)基:避光干燥,結(jié)塊后不能使用。

(2) 亞碲酸鉀卵黃增菌液、50%卵黃乳液等:冷凍保存,使用時,要常溫解凍,避免水浴加熱。

(3) 抗生素類:冷藏保存,溫度過高會導(dǎo)致靈敏度的下降。

(4) 兔血漿:冷藏保存少量的紅色不會影響結(jié)果。

 

7、 觀察時間的掌握:

按 SN、GB 等標準或培養(yǎng)基的使用說明所述時間進行觀察,時間過短或時間過長,單菌落的特征都不會很明顯。如單增李斯特氏菌顯色培養(yǎng)基,時間短單菌落看不到卵磷脂環(huán),時間長綿羊李氏菌也會產(chǎn)生沉淀環(huán)。OXA、PALCAM的觀察也如此,時間過長,李氏菌使整個平板成黑色,不利于觀察單個菌落。

 

8、 添加劑的添加:

(1)溫度的掌握。卵黃和抗生素類添加的溫度都不應(yīng)太高。

(2)定量。過多會抑制一些目標菌,太少又導(dǎo)致雜菌的過度生長。

 

8、 培養(yǎng)溫度的掌握:

(1)真菌類。25-28℃培養(yǎng)

(2)細菌類。李氏菌在增菌和生化中要求培養(yǎng)溫度在 30℃左右。

(3)其他一般在 36℃左右。

 

9、 接種方法:

常用的方法主要有劃線、三點接種、穿刺接種、傾注接種、涂布接種、液體接種。

 

10、革蘭氏染色方法:

染色時間的掌握、沖洗的方法。

 

11、最適計數(shù)范Χ

ù菌菌落由孢子和菌絲組成,相當擴散,在直徑9cm的平皿里,菌落數(shù)稍多就相互交叉重疊,影響計數(shù),但數(shù)量太少又會產(chǎn)生較大的誤差,因此選擇適當?shù)南♂尪扔嫈?shù)是保證結(jié)果準確的關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一。


我們對這方面作了一些觀察研究,首先是將實驗菌株的斜面培養(yǎng)物制成含有約106個/mL的孢子懸液,并用血球計數(shù)器在顯微鏡下準確計數(shù),然后將孢子懸液作10-1~10-6倍稀釋,吸取不同稀釋度的稀釋液接種于PDA,25℃培養(yǎng)5天后計數(shù)。30種常見ù菌的兩種不同計數(shù)方法所得結(jié)果比較顯示,大部分菌株?平板含有10~50個菌落的稀釋度時的計數(shù)與顯微鏡計數(shù)結(jié)果接近;有近一半的菌株,?個平板含50~100個菌落已較難計數(shù),而大部分菌株,超過100個/平皿或小于10個/平皿的計數(shù)結(jié)果就與顯微計數(shù)結(jié)果存在較大差別,因此,應(yīng)盡量選擇10~50個/平皿的稀釋度進行ù菌計數(shù)。


而對上述提及的菌絲很豐富、菌落特別擴散的?ù、根ù、犁頭ù等菌株,則應(yīng)在更少的范Χ內(nèi)計數(shù)(30個/平皿以內(nèi))。為控制ù菌的生長速度和菌落的生長范Χ,可在培養(yǎng)基中添加少量抗生素,如氯ù素(50~100mg/L),金ù素(20~100mg/L),慶大ù素(50mg/L),土ù素(100mg/L)等。


12、關(guān)于殺菌的幾個概念:

(1)抑制:是在亞抑制劑量因子作用下導(dǎo)致微生物生長停止,但在移去這些因子后生長仍可以恢復(fù)的生物學現(xiàn)象。

(2)死亡:在致死劑量因子的作用下或在亞致死劑量因子長時間的作用下,導(dǎo)致微生物生長能力不可逆喪失,即使移去這種因子后生長仍不能恢復(fù)的生物學現(xiàn)象。

(3)防腐:在某些化學物質(zhì)或物理因子作用下,能防止或抑制微生物生長的一種措施,它能防止食物變質(zhì)或防止食物ù變。

(4)消毒:利用某種方法殺死或滅活物質(zhì)或物體中所有原微生物的一種措施,它可以起到防止感染和傳播的作用。

(5)滅菌:利用某種方法殺死物體中包括芽孢在內(nèi)的所有原微生物的一種措施。

 


來源:網(wǎng)絡(luò)轉(zhuǎn)載,封面圖來源創(chuàng)可貼會員,食品微生物檢測小編整理。



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